Trang thông tin Di truyền học động vật - Di truyền học

Bệnh di truyền Cơ sở di truyền học Cơ sở di truyền phát triển cá thể Di truyền giới tính Di truyền miễn dịch Di truyền phân tử Di truyền tế bào Cấu tạo tế bào Chức năng tế bào

  • Trang chủ
  • Giới thiệu
  • Liên hệ
  • Bản quyền
  • Chính sách nội dung
  • Tài liệu di truyền học

13 Tháng Một, 2016 by Di Truyền Học Leave a Comment

Kỹ thuật tái tổ hợp DNA: Kết nối DNA

Bài này thuộc 1 trong 4 bài của kỹ thuật tái tổ hợp DNA ( Còn gọi là Kỹ thuật DNA tái tổ hợp )

Bài 1: Kỹ thuật tái tổ hợp DNA là gì
Bài 2: Đạt được gen mong muốn
Bài 3: Enzyme giới hạn
Bài 4: Khái niệm và phân loại vector
Bài 5: Kết nối DNA

Men kết nối DNA

Nguồn gốc , tính chất và chức năng của hai loại Enzym nối DNA thường gặp, xem bảng so sánh bên dưới

So sánh hai loại Enzym nối DNA

Loại enzymeEnzym nối DNA T4Enzym nối DNA E.coli
Nguồn gốcPhage T4E.coli
Nhân tử phụ trợATPNAD +
1-đầu dính và đầu bằng hỗ trợ nhau ở phân tử DNA chuỗi kép
Chất nền2- Hybrids RNA –DNA, Điểm đứt trên chuỗi RNA1-đầu dính hỗ trợ tương đồng
3-Sợi đơn cắt trong phân tử DNA chuỗi kép2-Sợi đơn cắt trong phân tử DNA chuỗi kép
Phạm vi ứng dụngRộng rãi nhấtHẹp

Cách thức nối

– Cách thức nối (lấy ví dụ men enzyme nối T4 DNA): phương thức nối phân đoạn DNA mục đích và phân đoạn DNA vector có hai loại: nối đầu dính tương đồng, nối đầu bằng và tái bản định hướng. Ba phương thức nối này đều có ưu và khuyết điểm riêng, điều kiện nối cũng khác nhau, xem bảng sau:

 

Cách thức nối phân đoạn DNA ngoại lai và phân đoạn DNA vector

Hạng mụcNối đầu dính tương đồngNối đầu bằngTái bản định hướng
Ưu điểmHiệu quả nối cao1-có thể nối hai đầu bằng bất kỳ1-hiệu quả nối cao
2-có thể hồi phục thậm chí sinh ra điểm cắt mới2-Định hướng xen vào
3-hạn chế hữu hiệu tự tạo vòng, khi đạt được hoặc sau khi đạt được phân đoạn DNA mục đích, kết nối nó với đầu dính có vector hai đầu dính
Khuyết điểm1-Vector và phân đoạn DNA mục đích tự tạo vòng1-Vector và phân đoạn DNA mục đích tự tạo vòng
2-Chèn hai chiều, chèn nhiều bản sao2-Chèn hai chiều, chèn nhiều bản sao
3-Hiệu quả nối thấp
Điều kiện nốiNhiệt độ thấp (<16 độ)

Men nối nồng độ thấp

ATP nồng độ cao

Nhiệt độ cao (khoảng 20 độ)

Men nồng độ cao và DNA nồng độ cao

ATP nồng độ thấp

 

Nhiệt độ thấp (<16 độ)

Men nối nồng độ thấp

ATP nồng độ cao

Biện pháp khắc phụcPhosphorylation DNA vectorPhosphorylation DNA vector
Chèn số số mol phiên đoạn: số mol vector là 2-3:1Chèn số số mol phiên đoạn: số mol vector là 2-3:1
Trong hệ thống phản ứng nối thêm vật chất polyethylene glycol nồng độ thấp

 

Đầu dính tương đồng là chỉ hai đầu phân đoạn DNA ngoại lai hoàn toàn giống đầu dính bổ trợ lẫn nhau của hai phân đoạn DNA vector, kết nối giữa chúng đọc gọi là kết nối đầu dính tương đồng. Còn tái bản định hướng là phương thức nối định hướng phân đoạn DNA ngoại lai chèn vào phân tử vector, yêu cầu đối với đầu cuối DNA là hai đầu cuối không hỗ trợ nhau trong phân tử DNA vector, mà chỉ có thể liên kết với đầu cuối tương ứng của phân tử DNA ngoại lai. Hiệu quả kết nối giữa các đầu dính tương đối cao, vị trí hai đầu của phân đoạn DNA ngoại lai khác nhau, khi nó chèn vào vector, xác suất hai đầu dính không hỗ trợ nhau trên DNA tuyến tính (vector hoặc phân đoạn DNA ngoại lai) tự tạo vòng giảm đi rất nhiều. Hiện nay tái bản định hướng được ứng dụng rộng rãi trong thực tiễn nhờ tính ưu việt của nó.

Filed Under: Di truyền phân tử Tagged With: DNA, DNA vector, enzyme

Trả lời Hủy

Bạn phải đăng nhập để gửi phản hồi.

Danh mục

  • Bệnh di truyền
  • Cơ sở di truyền học
  • Di truyền cá thể
    • Cơ sở di truyền phát triển cá thể
  • Di truyền giới tính
  • Di truyền miễn dịch
  • Di truyền phân tử
  • Di truyền tế bào
    • Cấu tạo tế bào
    • Chức năng tế bào
    • Di truyền tế bào chất
    • Nhiễm sắc thể
      • Cấu trúc nhiễm sắc thể
      • Chức năng NST
  • Di truyền tính trạng
    • Di truyền tính trạng chất lượng
    • Di truyền tính trạng số lượng
  • Tài liệu di truyền học
  • Tin Nổi Bật Về Di Truyền Học

Bài viết mới

  • Sự phân hóa vào thời kỳ phân cắt của trứng
  • Sự phân hóa của trứng trước lúc thụ tinh
  • Sự biệt hóa tế bào, Sự phân hóa tế bào là gì?
  • Thế nào là cơ sở di truyền của sự phân hóa
  • Nghiên cứu về di truyền học phát triển cá thể

Copyright © 2021 · Trang thông tin Di truyền học